Набор для тестирования EIA AGID

На этой странице содержится информация о тест-наборе EIA AGID для ветеринарное использование .
Предоставляемая информация обычно включает в себя следующее:
  • Показания к применению тестового набора EIA AGID
  • Предупреждения и предостережения относительно набора для тестирования EIA AGID
  • Информация о направлении и дозировке для тестового набора EIA AGID

Набор для тестирования EIA AGID

Эта обработка применяется к следующим видам:
Компания: Кентавр

ТЕСТ НА АНТИТЕЛА К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ

Принципы теста:

Тест на вирус инфекционной анемии лошадей (EIAV) представляет собой иммунодиффузионный анализ в агаровом геле (AGID), предназначенный для выявления наличия антител против EIAV в сыворотке лошадей. В тесте используется рекомбинантный белок, состоящий из основного белка p26 EIAV, для обнаружения специфических антител к EIAV. Образцы добавляют в 1% Noble Agar в чашку Петри, срезанную с семилуночным шаблоном, где рекомбинантный антиген p26 EIAV находится в центральной лунке, а эталонную сыворотку положительного контроля EIAV добавляют в каждую вторую лунку, всего три контрольные сыворотки положительного контроля EIAV. лунок для каждого семилуночного шаблона. Остальные три лунки содержат тестовые образцы. Образцы, положительные в отношении специфических антител к EIAV, реагируют с рекомбинантным антигеном с образованием комплекса антитело-антиген, который визуализируется в виде линии преципитации между лункой для теста и лункой для антигена. Более слабые образцы могут не образовывать полную линию преципитации, а вместо этого изменяют характер миграции внутрь к лунке для образца. Образцы, отрицательные в отношении специфических антител к EIAV, не будут образовывать линию преципитации с антигеном p26, а также не будут вызывать отклонение линий сыворотки положительного эталонного контроля EIAV.



Предоставленные материалы: Все материалы предоставляются готовыми к использованию.

1. Рекомбинантный антиген р26 EIAV в разбавителе со стабилизирующими белками и азидом натрия в качестве консерванта - 4 мл

2. Эталонная сыворотка EIAV Positive Control со стабилизирующими белками и азидом натрия в качестве консерванта - 11 мл

Этих реагентов достаточно для проведения до 200 тестов.

Необходимые, но не предоставленные материалы:

1. Баланс

2. Микропипетка с одноразовыми наконечниками

3. Горячая плита или микроволновая печь

4. 1л фляга

5. Дистиллированная или деионизированная вода

6. Борная кислота

7. Гидроксид натрия

8. Благородный агар

9. Пластиковая чашка Петри диаметром 100 мм с крышками.

10. Иммунодиффузионный резак для ИФА

11. Вакуумный насос

12. Узкофокусный источник света высокой интенсивности

Меры предосторожности

1. Не смешивайте реагенты из одного набора с реагентами из другого серийного номера или партии.

2. Не используйте после истечения срока годности, указанного на этикетке упаковки.

3. Только для использования на животных и для продажи только одобренным USDA/APHIS лабораториям.

4. Обращайтесь со всеми реагентами и образцами как с потенциально опасными.

5. Перед каждым использованием нагревайте реагенты до комнатной температуры (15–25 °C).

Хранение и стабильность:

Все материалы, входящие в состав тестового набора, следует хранить при температуре 2–8 °C.

Сбор и подготовка образцов:

С этим тест-набором рекомендуется использовать лошадиную сыворотку. Образцы цельной крови должны иметь фракцию сыворотки, отделенную центрифугированием и декантацией.

Сепараторы сыворотки также могут быть использованы. Антикоагулянты не рекомендуются.

Образцы могут храниться со сгустком или без него при температуре холодильника (2–8 °C) до 21 дня. Образцы, хранящиеся на сгустке, должны иметь фракцию сыворотки, отделенную центрифугированием и декантацией перед использованием. Если требуется более длительное хранение, сначала следует отделить сыворотку от сгустка, а затем образцы заморозить при -20 °C. Следует избегать повторного замораживания и оттаивания. Замороженные образцы должны оттаивать при комнатной температуре (15-25°C) и перед началом испытаний должны быть тщательно перемешаны путем осторожного переворачивания.

Приготовление агарового геля:

1. 9 граммов борной кислоты (H3B03FW=61,83 г/м) растворяют в 1 л дистиллированной воды.

преднизон 40 мг побочные эффекты

2. 2 грамма гидроксида натрия (NaOH FW = 40 г/М) добавляют к боратному буферу и перемешивают до растворения. В качестве альтернативы можно использовать 50-кратный запас гидроксида натрия (2,5 М NaOH в дистиллированной воде). Конечная концентрация раствора составляет 0,146 М борной кислоты, 0,05 М NaOH. Измеряют рН раствора. Приемлемый диапазон pH 8,6 ± 0,2.

3. К раствору добавляют 10 граммов Noble Agar (1% вес./об.) и перемешивают в течение нескольких минут, пока не образуется однородная суспензия.

4. Затем суспензию нагревают в микроволновой печи или на плите до тех пор, пока агар не растворится.

5. Раствору дают остыть в течение нескольких минут и добавляют 15 мл в пластиковые чашки Петри диаметром 100 мм.

6. Агару дают остыть до тех пор, пока он не станет твердым, чашки накрывают крышками и затем хранят в перевернутом виде при 2–8 °C до 7 дней до использования.

Разрезание агарового геля:

7-луночный шаблон для иммунодиффузии EIA используется для формирования лунок. Имеется одна центральная лунка с шестью окружающими лунками, расположенными на расстоянии 2,4 мм друг от друга и шириной 5,3 мм. После разрезания пробки удаляются с помощью канюли или ее эквивалента под вакуумом для создания схемы лунок. Если в лунках присутствует влага, ее следует удалить или испарить перед добавлением реагентов и проб. Гели следует разрезать в тот же день, когда они будут использоваться.

Предварительные шаги для проведения анализа:

1. Достаньте тестовый набор из холодильника примерно за час до использования, чтобы дать реагентам нагреться до комнатной температуры (15–25 °C).

2. Используйте одну лунку для каждого образца сыворотки.

3. Определите и запишите расположение лунок для каждого образца.

Процедура тестирования:

1. Добавьте 50 мкл рекомбинантного антигена p26 (Ag) EIAV в центральную лунку семилуночной схемы так, чтобы раствор был на одном уровне с верхней частью лунки.

2. Добавьте 50 мкл эталонной сыворотки положительного контроля EIAV (RS) в каждую вторую лунку снаружи лунки с антигеном так, чтобы раствор был на одном уровне с верхней частью лунки.

3. Добавьте 50 мкл образца (S1-S3) в оставшиеся три лунки в шаблоне так, чтобы раствор был на одном уровне с верхней частью лунки.

а. В общей сложности 3 образца могут быть испытаны на схеме лунок. Если тестируется менее 3 образцов, заполните оставшиеся лунки для образцов холостым раствором, например фосфатно-солевым буфером (PBS).

б. ПРИМЕЧАНИЕ. См. рисунок 1 для загрузки схемы скважин.

4. Инкубировать при комнатной температуре (15–25 °C) в закрытой влажной камере.

5. Прочтите планшет и запишите результаты через 24 часа. Если реакция завершается через 24 часа, можно сообщить о результатах. Для слабоположительных образцов может потребоваться до 48 часов до завершения реакции.

Контроль качества:

Чтобы тест считался действительным, эталонные линии должны быть легко визуализированы с использованием узкофокусного источника света высокой интенсивности. Окончание линий на лунке с образцом для отрицательного и слабо положительного результата или в виде непрерывной линии между лункой для эталонной сыворотки и лункой с образцом должно быть четко идентифицируемым.

ПРИМЕЧАНИЕ: линии заделки могут быть не полностью видны через 24 часа, поэтому может потребоваться более поздняя интерпретация.

Полученные результаты:

Для интерпретации следует использовать узкофокусный источник света высокой интенсивности. Читайте гели на черном фоне или в темном окружающем свете. Интерпретируйте опорные линии в соответствии со следующим:

1. Положительный – Линии эталонной сыворотки (RS) положительного контроля соединяются и образуют непрерывную линию между лункой с рекомбинантным антигеном p26 (Ag) EIAV и лункой с образцом (S3, рис. 2).

2. Слабо положительный результат – линии эталонной сыворотки положительного контроля (RS) слегка изгибаются в сторону лунки рекомбинантного антигена p26 (Ag) EIAV и от лунок эталонной сыворотки положительного контроля, но не образуют полную линию (S2, рис. 2).

3. Отрицательный – Положительный контроль Линии эталонной сыворотки (RS) не изгибаются или изгибаются немного в сторону от лунки с рекомбинантным антигеном p26 EIAV (Ag) и продолжаются в лунку для образца (S1, рис. 2).

4. Очень сильный положительный результат — линии эталонной сыворотки положительного контроля (RS) поворачиваются к лунке с рекомбинантным антигеном p26 (Ag) EIAV, и широкая нечеткая линия формируется ближе к лунке с антигеном, чем к лунке с образцом (S3, рис. 3).

5. Неспецифические линии. Они могут располагаться между лункой с рекомбинантным антигеном p26 EIAV и лункой для образца, однако линии эталонной сыворотки положительного контроля будут проходить через эти линии. Неспецифические линии не образуют непрерывную линию с линиями эталонной сыворотки положительного контроля. Отрицательная или специфическая для EIAV положительная идентификационная линия все еще может быть получена при наличии неспецифических линий, однако необходимо соблюдать осторожность, чтобы убедиться, что образец интерпретируется в соответствии с окончанием контрольных эталонных положительных линий (S2, рисунок 3).

6. Ореол вокруг лунки. Вокруг некоторых лунок для проб может появиться ореол или дымка из-за липидов или других материалов в сыворотке. Если линии эталонной сыворотки положительного контроля все еще можно четко прочитать, ореол не влияет на результаты. Однако, если этот ореол затрудняет чтение линий эталонной сыворотки положительного контроля, следует провести повторное тестирование (S1, рис. 3).

Примечания:

1. Читать в 24-48 часов. Для формирования слабых срабатываний может потребоваться до 48 часов; сыворотки от подозрительных случаев должны быть проанализированы снова через 48 часов.

2. Положительный результат свидетельствует о наличии в сыворотке крови преципитирующих антител против EIAV. Отрицательный результат указывает на отсутствие антител к EIAV.

3. Все положительные результаты, в том числе слабоположительные, должны быть проверены повторно до сообщения результатов.

4. Сомнительные результаты должны быть повторно протестированы перед сообщением. В Соединенных Штатах образцы, по-прежнему дающие сомнительные или сомнительные результаты, должны быть представлены в лаборатории национальных ветеринарных служб для подтверждения. В других странах пользователи должны соблюдать применимые законы и политику своих национальных органов по охране здоровья животных.

5. Если мать положительна, тест жеребенка может быть положительным в течение более 6 месяцев из-за колостральных антител. В таком случае жеребенка и самку следует ежемесячно проверять до возраста 12 месяцев, чтобы определить, становится ли жеребенок отрицательным.

6. Как только в этом тесте будет определен положительный результат у лошади, она считается инфицированной на всю жизнь.

7. Подозреваемые лошади (т. е. лошади с клиническими признаками или историей, предполагающей воздействие EIAV) с отрицательным результатом должны пройти повторное тестирование через 2-3 недели.

8. Инфекция EIAV может быть острой, хронической или незаметной. Лошади с любой из этих форм могут дать положительный результат на антитела. У лошадей в течение инкубационного периода тесты могут быть слабо положительными. Если есть подозрение на воздействие, через 2-3 недели следует протестировать второй образец.

Продажа и использование теста ограничены лабораториями, одобренными государственными и федеральными (USDA) властями. Положительные, несоответствующие или сомнительные образцы следует направлять в государственные или федеральные лаборатории (NVSL) для подтверждения, а о результатах немедленно сообщать должностным лицам штата.

ВЛН 430/ПКН 5515.22

Только для животных

Изготовлены по: SafePath Laboratories, LLC., Карлсбад, Калифорния 92010 США

760-929-7744

Распространяется: Centaur, Inc., 1351 Old 56 Highway West, Bldg. F, Олате, KS 66061

800-236-6180 - www.centauranimalhealth.com

PN 4933 Ред. 1

Цена за номер: 1488036.1

КЕНТАВР ЗДОРОВЬЕ ЖИВОТНЫХ
1351 - F WEST HWY 56, ОЛАТЕ, Канзас, 66061
Телефон: 913-390-6184
Стол заказов: 800-236-6180
Факс: 913-390-5907
Интернет сайт: www.centauanimalhealth.com
Эл. адрес: sales@centauanimalhealth.com
Были предприняты все усилия для обеспечения точности опубликованной выше информации о тест-наборах EIA AGID. Тем не менее, читатели обязаны ознакомиться с информацией о продукте, содержащейся на этикетке продукта для США или листке-вкладыше.

Copyright © 2021 ООО «Анималитикс». Обновлено: 2021-08-30